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冷凍干燥機在病毒標準物質研究中的應用
發(fā)布日期:2022/12/28 10:31:14

病毒是一種個體微小,結構簡單,只含一種核酸DNA或RNA,必須在活細胞內寄生并以復制方式增殖的非細胞型生物。病毒是一種非細胞生命形態(tài),它由一個核酸長鏈和蛋白質外殼構成,病毒沒有自己的代謝機構,沒有酶系統(tǒng)。

真空凍干病毒

冷凍干燥全稱真空冷凍干燥,簡稱凍干,是在低溫減壓條件下,利用水的升華使制品低溫脫水而達到干燥的一種技術。凍干在低溫低氧條件下進行,多數(shù)生物反應停滯,且處理過程無液態(tài)水存在,使物料原有結構和形狀得到大程度的保護。

真空凍干病毒比較穩(wěn)定,可于室溫短期保存, 4~8℃長期保存。此法綜合利用了各種有利于毒種保存的因素,具有成活率高,變異性小等優(yōu)點,是常用的較理想的毒種保存方法之一。病毒疫苗凍干主要關注的是凍干后病毒滴度、殘余水分、熱穩(wěn)定性、抗原性及相關免疫實驗。

凍干病毒會使用保護劑,保護劑一般采用脫脂牛奶或血清、人血白蛋白等,作用機理是在冷凍干燥的脫水過程中穩(wěn)定病毒結構,防止細胞膜受冷凍或干燥而造成損傷。


實驗過程

第一步

將滅活后的病毒液制備藍耳病病毒核酸檢測標準物質,將純化后的病毒進行無菌檢測、外源性病毒檢測。

第二步

將凍干保護劑與藍耳病病毒液混合搖勻后,移液分裝至10支容量為3 mL的具十字橡膠塞的無菌瓶中(十字塞的十字部分插入瓶中,塞冒懸于瓶口),每支1 mL試樣。

第三步

將10支分裝好的試樣瓶置于-80 ℃的預凍30 min后取出,預凍后樣品瓶置于冷阱溫度已達-45 ℃的凍干倉中,運行真空泵開始凍干,一直到樣品質量不發(fā)生變化時凍干結束并在真空狀態(tài)下壓蓋密封十字橡膠塞,得到凍干后的樣品。

第四步

采用實時熒光定量RT-PCR方法檢測藍耳病病毒標準物質的均勻性、穩(wěn)定性,得到藍耳病病毒檢測標準物質也為該病毒定性和定量檢測提供標準物質。

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